BeaverBeads? His-tag Protein Purification用于免疫印跡或考馬斯藍染色分析
該研究將細菌表達的His標(biāo)記的TMED2截短體（His-TMED2）與BeaverBeads? His偶聯(lián)，然后與表達F-MITA截短體的HEK293細胞提取物一起孵育。通過用SDS上樣緩沖液煮沸洗脫與磁珠結(jié)合的蛋白質(zhì)，并進行了免疫印跡或考馬斯藍染色分析。
武漢大學(xué)劉昱教授等在出版于Cell Reports 8.032的通過加強MITA二聚化和促進TMED2販運，增強細胞IFN對DNA病毒的反應(yīng)中總結(jié)：
由于MITA在天然免疫識別胞質(zhì)異常DNA的信號通路中的重要作用，其表達和活化的調(diào)控機制一直是研究熱點。該研究發(fā)現(xiàn)，TMED2通過增強MITA的二聚化、促進MITA從核糖體向ER上的轉(zhuǎn)位、促進MITA從ER向核周小泡的轉(zhuǎn)運，從而增強抗DNA病毒天然免疫反應(yīng)。
該研究將細菌表達的His標(biāo)記的TMED2截短體（His-TMED2）與BeaverBeadsTM His偶聯(lián)，然后與表達F-MITA截短體的HEK293細胞提取物一起孵育。通過用SDS上樣緩沖液煮沸洗脫與磁珠結(jié)合的蛋白質(zhì)，并進行了免疫印跡或考馬斯藍染色分析。
研究人員發(fā)現(xiàn)敲低或敲除TMED2明顯抑制HSV-1感染誘導(dǎo)的MITA二聚化以及轉(zhuǎn)錄因子IRF3和NF-κB的活化，降低I型干擾素和炎癥因子的相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄；在TMED2敲除的細胞中HSV-1復(fù)制也明顯增加，表明TMED2促進抗DNA病毒天然免疫信號通路。進一步的研究發(fā)現(xiàn)HSV-1感染誘導(dǎo)內(nèi)源性TMED2與MITA在ER腔內(nèi)發(fā)生相互作用。TMED2通過增強MITA與轉(zhuǎn)位復(fù)合體關(guān)鍵成分TRAPβ的相互作用，促進MITA翻譯后從核糖體向ER轉(zhuǎn)位；TMED2也通過強化MITA與COPII復(fù)合物成分Sec24C的相互作用，促進MITA經(jīng)COPII復(fù)合物組裝，由ER向高爾基體轉(zhuǎn)運。
該論文發(fā)現(xiàn)了MITA信號通路的新調(diào)控分子TMED2，并解析了其作用機制，為構(gòu)建天然免疫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供重要支持，也為篩選抗病毒藥物的分子靶點提供線索。
圖 免疫印跡及考馬斯藍染色分析
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